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          【CRISPR干貨】體外sgRNA靶點效率檢測到底怎么做?

          【CRISPR干貨】體外sgRNA靶點效率檢測到底怎么做?



              十多年前,當研究人員開始解析細菌和古細菌中一個稱為 CRISPR 結構的時候,他們并沒有預料到這會給基因編輯世界帶來一場風暴。

              在過去的幾年時間里,CRISPR已經迅速席卷了整個生物王國,成為了DNA突變和編輯的一種熱門技術,迄今為止,CRISPR方法幾乎在每種實驗細胞中均能起作用,包括人類細胞,小鼠,大鼠和斑馬魚等細胞。



              CRISPR的質粒和病毒大家很常見了,abm公司除了提供高質量的CRISPR質粒和病毒之外,也提供成熟的sgRNA靶點篩選試劑盒(G953),大家也許會問,此試劑盒如何使用呢?


              sgRNA靶點篩選試劑盒(G953)可用于在體外快速檢測CRISPRsgRNA靶點效率,以此尋找到敲除效果最好的那個靶點。


              接下來小愛給您簡述一下如何使用試劑盒進行CRISPR靶點篩選實驗,原理如下圖,Cas9蛋白可在sgRNA的引導下對雙鏈DNA進行酶切。






          實驗試劑
          1. abm公司合成的高質量sgRNA(目標DNA上設計3個sgRNA)

          2. abm公司合成的DNA模板擴增引物

          3. sgRNA靶點篩選試劑盒(G953)



          實驗步驟




           第一部分 


          1. 裂解細胞獲得細胞裂解液


          2. 細胞裂解液立刻進行下游實驗,或儲存在-20℃。


          3. PCR擴增敲除的DNA模板,反應體系如下:


          4. 擴增程序如下:


          5. 用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物純度。





           第二部分 


          1. 設置如下反應體系:


          2. 37℃孵育30分鐘,然后分別加入2ul的Protein Degrader在37℃孵育10分鐘以降解Cas9蛋白等,更方便下游的瓊脂糖凝膠電泳檢測分析。


          3. 瓊脂糖凝膠電泳檢測不同靶點的敲除效率,其中陽性對照敲除之后會有1.5kb和0.6kb的兩條帶。


          如下圖所示,可以得到在此次設計的3個靶點中,靶點3的效果最好,靶點2的效果次之,靶點1的效果最差。





          CRIPSR/Cas9系統不同的sgRNA的切割效率有著比較明顯的差異,

          sgRNA靶點篩選試劑盒(G953)用于快速檢測CRISPR靶點敲除效率,

          可以在進行耗時費力的

          基因敲除細胞系構建或者基因敲除動物等實驗之前,

          對CRISPR靶點進行驗證。

          abm公司也提供CRISPR靶點設計以及高質量的sgRNA合成服務,

          結合我們的全面優質的CRISPR相關試劑,

          可以為科研工作者提供全面系統的幫助。


          下面給大家看幾個abm的CRISPR產品的應用實例:


          案例一

          新加坡的研究學者們使用abm的CRISPR慢病毒質粒進行研究,

          其結果發表在Nature子刊,影響因子12分的《Nature communications》上。





          更多細節,請您撥打我們技術支持的電話0511-83367989轉602,

          或添加技術老師的QQ,進行咨詢,

          也可以點擊“閱讀原文”直接找到對應銷售工程師,進行訂購:

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